药物分析

主要由药品质量标准中“检查”项下的杂质检查来控制

应把药物的性状，理化常数，杂志检查，含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度

药物纯和化学纯

制剂生产中引入的杂质

易发生氧化反应的结构（醛，醚，酚羟基等）

在自然界中分布比骄傲广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如酸，碱，水分，氯化物，硫酸盐，重金属，砷盐等

在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中游离水杨酸等

本身一般无毒，但其含量的多少可以反映出药物的纯度水平，称其为“信号杂质”，如氯化物，硫酸盐等属于信号杂质

对人体有毒害的杂质。如重金属，砷盐，氯化物等应严格控制，以保证用药安全

来源于生产过程中，一般是已知的和确定的，直接影响药物的稳定性，反映生产工艺情况

合成中未反应完全的原料，中间体，副产物，降解产物等

生产中使用的有机溶剂

对照法

灵敏度法

比较法

杂质对照品法

供试品溶液的自身稀释对照法

两法并用法

对照药物法

外标法

加校正因子的主成分自身对照法

不加校正因子的主成分自身对照法

面积归一化法

同上

标准溶液加入法

多肽，酶类

酸碱度检查法

内消色法

内消色法

称取硫酸铁铵0.863g----1000ml量瓶，作贮备液。临用先取

溶于水，稀酸或与水互溶有机溶剂，不含与金属离子强配位基团的药物

硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，可以与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液。

25ml纳氏比色管3支，甲管-标准管--加标准铅溶液加醋酸盐缓冲液；乙管-供试品管-供试品溶液；丙管-标准加样管-供试品加标准铅溶液和醋酸盐缓冲液。分别加硫代乙酰胺。同置白纸上，自上而下透视，丙管＞甲管＞乙管

标准铅溶液--加硝酸防止铅盐水解。

供试品有颜色，甲管加入少量稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，颜色一致，加入硫代乙酰胺比较。如果无法比较，用第二法

供试品含有高铁盐，弱酸条件容易氧化硫化氢析出硫。分别加入维生素C，还原高铁离子为亚铁离子。

金属离子与硫化氢的呈色，受pH影响大，3-3.5--沉淀完全，酸度增大，呈色浅，甚至不显色。因此如果供试品用强酸溶解，要用氨水调至中性后，在加入pH3.5的醋酸盐缓冲液调节酸度

配置供试液时，用盐酸超过1ml，氨试液超过2ml或加入其他试剂进行处理者，为避免标准管的基质差异，应当进行平行处理。除另有规定外，甲管应取同样试剂在瓷皿中蒸干，加醋酸盐缓冲液和水，微热溶解后，移至比色管，加标准量铅溶液，加水稀释

难溶于水，稀酸，与水互溶有机溶剂的有机药物，含可与金属离子强配位基团的芳环和杂环药物

重金属会与含有强配位基团的药物形成价键作用；或者供试品不溶解，可能包裹重金属。要先将其炽灼破坏，加硝酸进一步破坏，蒸干。加盐酸转化为易溶水的氯化物，再按第一法检查

供试品按炽灼残渣法炽灼，再取遗留的残渣，或直接取炽灼残渣项下遗留的残渣，加硝酸，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸，蒸干加水，加氨试液，调节pH，在加醋酸缓冲液，微热溶解，置于纳氏比色管，加水稀释，作为乙管--供试品管。      另取供试品溶液，置于瓷皿中蒸干加入醋酸盐缓冲液和水，微热溶解，置于比色管，加入标准铅溶液，作为甲管--标准管。   甲乙分别加入硫代乙酰胺，同置于白纸上，自上而下透视，甲管颜色＞乙管

炽灼残渣加硝酸加热，必须蒸干，除尽氧化氮，否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色

为了消除盐酸或者其他试剂中夹杂重金属的影响，在配置供试品溶液时，使用盐酸超过1ml，使用氨溶液超过2ml，以及用硫酸与硝酸进行有机破坏或其他试剂处理者，除另有规定外，甲管应取同样同量试剂置瓷皿中蒸干后，依法检查

含钠盐和氟的有机药物，在炽灼时能腐蚀瓷坩埚，而引入重金属，应该改用铂坩埚或更硬质玻璃器蒸发皿

溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物---磺胺类，巴比妥类

硫化钠与铅生成硫化铅

取供试品适量，加入氢氧化钠和水溶解，置于纳氏比色管，加入硫化钠，与标准铅溶液同法处理后比较颜色

硫化钠对玻璃有一定腐蚀性，久置产生絮状物，要临用新制

饱和硫化氢水溶液：上述方法中使用的硫化钠或硫代乙酰胺，均可以使用新制的饱和硫化氢水溶液替代。

锌与酸作用产生新生态的氢，与砷盐反应，生成具有挥发性的砷化氢，遇到溴化汞试纸，产生黄色到棕色砷斑。与标准珅溶液的砷斑对比判定

仪器装置

标准砷斑的制备

检查法--样品砷斑的制备

标准砷溶液的制备---用三氧化二砷配置贮备液，临用前用稀硫酸定量稀释配置

碘化钾和氯化亚锡

醋酸铅棉花的作用

仪器和试剂要求

含硫药物的预处理

杂环有机药物的预处理

锌与酸作用产生新生态的氢，与砷生成挥发性的砷化氢，可以还原二乙基二硫代氨基甲酸根，产生红色胶态银，用目比视法或测定吸光度。检查杂质限量或含量测定。

DDC-Ag检砷装置如图2

标准砷溶液的制备：标准砷溶液加盐酸和水，再加碘化钾和酸性氯化亚锡，再加锌，立即安装导气管，水浴反应，添加三氯甲烷

检查法--供试品溶液，加碘化钾和酸性氯化亚锡，再加锌，同法操作。置于白色背景上，自上而下观察比较。或在510nm的分光光度法测定吸光度。

除与第一法相同外，还有

灵敏度范围--AS在1~10ug，所得胶体银溶液稳定，重现性好，而古蔡氏法通常仅限于在2ug的As检查

二乙基二硫代氨基甲酸银溶液--取DDC-Ag0.25g，加三氯甲烷和三乙胺，用脱脂棉滤过，制备。置于棕色瓶内，密封，阴凉处

锑化物的消除--加入酸性氯化亚锡和碘化钾试液，可进一步抑制锑化氢的形成

适用对象

原理

少量氯化汞可以提高灵敏度

原理

适用对象

受热比较稳定的药物

取供试品，混匀，取一定重量，置于干燥至恒重的扁形称量瓶中，称定，105℃干燥至恒重，计算干燥失重

干燥失重=减失的重量/取样量*100%

操作要求，干燥时平铺供试品在容器中，规定厚度，瓶盖放置好。取出时盖好盖子，置于干燥器中放冷，称定。

渐次升高温度干燥法：

高温干燥法

定时失重法

熔点低，受热易分解的供试品

采用减压干燥器或恒温减压干燥器。常用干燥剂为五氧化二磷，硫酸，硅胶。

受热分解或易升华的供试品

将供试品置干燥器中，利用干燥器内的干燥剂吸收水分，干燥至恒重

使用五氧化二磷，需要将干燥剂平铺在培养皿中，置于干燥器中。干燥剂表面结块，应该将表面刮去，另外加五氧化二磷再使用。使用后的五氧化二磷要进行无害化处理。

使用硫酸时，将硫酸盛于培养皿中或烧杯中，不能直接倾于干燥器中，可以反复使用--将含水硫酸置于烧杯中，加热至冒白烟，保持110℃30min左右。

硅胶为变色硅胶，里面添加有氯化钴。无水氯化钴为蓝色，吸水由蓝色变为蓝紫，紫红转变为粉红色显示硅胶失效。105℃干燥后可以反复使用

碘氧化二氧化硫为三氧化硫时，需要一定的水分参与反应，根据定量反应关系和消耗碘的重量，计算参与反应的水分含量。为了使反应往正反应方向进行，费休氏试液大都使用无水甲醇配制碘-二氧化硫的溶液，并添加无水的吡啶或适宜的有机叔胺，以定量吸收反应产物HI,SO3。保障了滴定反应的准确定量进行。费休氏试剂中，仅碘与水作用的摩尔比1：1，作为化学计量反应定量的基础。反应完毕后，多余的游离碘呈现红棕色，即可确定为终点。

费休氏试液的配制

费休氏试液的标定-----费休氏容量滴定测定法

仪器要求

适用范围

费休氏试液的选用：不同的全自动水分测定仪，对费休氏试液的要求也可能不同。所以，使用时，要根据试剂说明，正确使用

费休氏试液的安全处置：费休氏试液有毒性，稳定性差，保存期短，含吡啶的费休氏试液有恶臭。要特别注意。

血浆和血清可以任意选用，血浆中药物的浓度可以反应药物在体内作用部位的状况

血浆50-60%--抗凝剂，离心，淡黄色上清液

血清20-40%  静置，离心，上层淡黄色液体

全血，抗凝剂，不离心

制成水性基质匀浆溶液

蛋白沉淀法--蛋白沉淀剂--三氯乙酸

酸水解或碱水解法--

酶水解法---蛋白水解酶

血样：分离--硬质玻璃，聚乙烯管--冷冻长期保存，4°短期保存

尿样：冷藏，加防腐剂，冷冻

唾液：4°以下，冷冻保存时，解冻后充分搅匀后再用

采样后立即终止酶的活性，常用方法--液氮中快速冷冻，微波照射，匀浆，沉淀，加入酶活性阻断剂，抗氧化剂，调节pH,样品煮沸等

药物进入体内会与血浆蛋白结合，或转化为代谢产物。---使待测药物释/代谢物释放，测定药物/代谢物总浓度

样品介质组成复杂：分离

待测组分浓度低--浓集

防止仪器污染，劣化（去蛋白）

提高测定灵敏度/选择性--化学改性（衍生化）

溶剂沉淀法

中性盐析出法

强酸沉淀法/加入强酸

加入重金属盐

液相萃取法LLE

固相萃取法  SPE

固相微萃取技术 SPME

微透析MD

超滤法

测定尿药总量，水解缀合物，趋向于直接测定缀合物

药物或其Ⅰ相代谢产物与体内的内源性物质结合的产物称为Ⅱ相代谢产物或者缀合物

酸水解法

酶水解法

溶剂解法

气相色谱GC

高效液相色谱HPLC

生物样品中药物及其代谢产物的测定需使用含对照标准物质的校正样品和质量控制样品作为参比，一般对照标准物质的来源有

是指在样品测试过程中，由于待测物以外的其他物质的存在，直接或间接影响待测物响应的现象，在质谱检测中，基质效应会改变待测物质的离子化效率，引起测定物检测信号抑制或增强，除正常基质外，还应关注其他样品的基质效应。

在空白基质中加入已知量待测物质对照标准物质制成的样品，用于监测生物分析方法的效能和评价每一分析批中试验样品分析结果的完整性和正确性。

包括试验样品，适当数量的校正标样和QC样品的一个完整系列。一个分析批连续测量不宜超过3天

开路粉碎

循环粉碎

闭塞粉碎

自由粉碎

区别是达到粉碎要求的粉末不能/能及时排出，从而影响。不影响继续粉碎的操作

单独粉碎

混合粉碎

干法粉碎

湿法粉碎

利用药物在低温下脆性增加，韧性和延伸性降低得性质，以提高粉碎效率方法

适用范围

优缺点

万能粉碎机

制备微乳，脂质体，混悬剂等

冲眼筛

编织筛

甲基纤维素

羟丙纤维素

羟丙甲纤维素

羧甲基纤维素

如果药物能够溶解于抛射剂中克制成溶液型气雾剂

辅助性溶剂既可以和抛射剂混溶，又可以增加药物的溶解度，这类溶剂被称为潜溶剂--潜溶剂的作用是要让药物溶解得到澄明均相溶液

潜溶剂--乙醇，聚乙二醇，丙二醇，甘油，乙酸乙酯，丙酮等

乙醇，甘油可以用于口腔吸入或鼻腔气雾剂

抛射剂的用量越大，喷出的液滴越细

注意的问题

先将药物进行微粉化处理，然后制成混悬液，再进行分装，添加适量助悬剂

制备有一定的难度，颗粒变大，聚集，结块，堵塞阀门

为防止颗粒变大，选择再抛射剂中溶解度较小的衍生物

先将药物溶剂在水性或者油性介质中，然后再制成均匀的乳剂，再进行分装，乳化剂的选择很重要

压灌法

冷灌法

抛射剂氟利昂破坏大气臭氧层

需要耐压容器和阀门系统等机械设备

局部应用为主，喷射的液滴较粗，但可以满足临床需求

由于不是加压包装，制备方便，成本低

既有物化给药的特点，又避免使用抛射剂

雾化器

容器

每瓶总喷数

每喷喷量

每喷主要含量

递送剂量均一性

微细粒子剂量

装量差异

装量

无菌

微生物限度

可以发挥局部及全身作用，具有靶向，高效，速效，毒副作用小等特点

大小小于10，大多数小于5

可加入附加剂改善粉雾剂的流动性

粉雾剂易吸潮，应注意储存条件

仅含微粉化药物的粉雾剂、

、药物加适量附加剂改善粉末的流动性

一定比例的药物和载体混合均匀体

药物与载体及各种附加剂的混合体

为防止药物的聚集，增加其流动性，尝使用载体

常用载体--乳糖FDA唯一批准

药物与载体的内聚力适宜

药物

附加剂

载体

胶囊型给药装置

泡囊型给药装置---碟式吸入器

贮库型给药装置

递送速率和递送剂量

递送速率和递送剂量，微细粒子剂量，无菌检查

直肠上静脉---6cm

直肠中静脉，直肠下静脉，肛管静脉---2cm

直肠内容物--栓剂的使用深度--ph的影响--病理状态

溶解度---大更容易吸收

粒度---以为溶解状态存在于栓剂中的药物，其粒度大小影响释放，溶解及吸收，粒径越小，越容易溶解，吸收越快

解离度--未解离的药物容易透过肠道粘膜吸收入血，未解离的分子越多，吸收越快

基质的种类

附加剂

理想栓剂的基质

常用基质

吸收促进剂

吸收阻滞剂

硬化剂

增稠剂

挤压成型法

模制成型法

栓剂的置换价

阿司匹林，双水杨酯

吲哚美辛，吡罗昔康，美洛昔康，尼美舒利，对乙酰氨基酚

紫外特征光谱--鉴别，含量均匀度，溶出度，释放度

红外特征光谱--鉴别

酮洛芬

美洛昔康

中性或弱酸性条件下进行

灵敏度高，在稀溶液中进行

水杨酸类

对乙酰氨基酚

烯醇式羟基

FeCl3--紫色

稀盐酸，析出白色沉淀，沉淀在醋酸铵上溶解

双氯芬酸钠

美洛昔康

最大吸收波长

最大与最小吸收波长

吸光度法

吸光度比值法

化学结构复杂，差异小的药物的鉴别---专属性强

游离水杨酸

有关物质

游离水杨酸

对氨基酚，对氯苯乙酰胺等

对氨基酚及有关物质---HPLC---离子对色谱法

对氯苯乙酰胺---HPLC---磷酸盐缓冲液-甲醇

-COOH，可以直接用碱滴定

缺点--酸性杂质干扰，酯键水解干扰

适用范围--仅用于合格原料药测定，不适用于制剂含量的测定

应用---针对具有游离羧基的原料药，水杨酸，双水杨酯，二氟尼柳，等。选择合适的溶剂和指示剂

注意事项--规范操作，不断旋摇，快速滴定--减少水解产生的误差

适用于含有酯的结构药物

优点--消除了酯键水解的干扰

缺点--酸性杂质干扰

做空白实验

美洛昔康

和羧基共轭的烯醇式羟基，具有羧酸性质，甲醇，乙醇，丙酮，水中难溶，定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，用盐酸滴定液回滴定

邻苯二酚，酚羟基

与金属离子配位显色

易被氧化

烃氨基侧链

游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂，其盐可溶于水

手性碳原子

苯环特征吸收带，254nm为中心红移蓝移

沙丁胺醇--紫色

紫色

非水溶液滴定法的种类

非水溶剂的种类

适用范围与溶媒的选择

基本原理

酸根的影响

测定有机碱的卤酸根盐时

测定有机碱的硝酸盐---释放的硝酸破坏指示剂--电位法指示终点或加入Vc

测定有机碱的硫酸盐

滴定剂的稳定性

盐酸异丙肾上腺素原料药的测定，盐酸布比卡因的含量测定

药物分子中的苯酚，其邻位和对位活泼的氢可以和溴发生溴代反应，然后用硫代硫酸钠滴定剩余的溴，测得含量

溴代反应

置于碘瓶---防止溴和碘的挥发

用空白试验校正，空白试验可以减少溴和碘逸失带来的误差

溴滴定液--是溴酸钾加溴化钾，然后在酸性条件下反应生成溴

溴标准滴定液不能加入太多--因为有氧化作用，会把苯酚氧化，及破坏药物分子

在酸性--HCL--中进行

杂质/辅料对吸收无干扰

百分吸收系数法

注意单位

重氮化偶合显色或与亚铁离子配文显色

氨基磺酸铵分解剩余亚硝酸--偶合剂与亚硝酸反应也能显色干扰测定

提取溶剂

提供碱性环境---盐酸克伦特罗显弱碱性--在碱性环境中游离多

成为盐酸盐，溶于水中

酸性环境下，克伦特罗呈阳离子与小柱结合，酸性或中性物质可以用水和甲醇淋洗除去

除去中性或酸性物质

实现待测成分的净化

特殊杂质--PABA,BABA,2,6-二甲基苯胺，4-氨基-2氯苯甲酸

和生物碱称点击发生反应，生成沉淀可鉴别

在水溶液中不能用标准酸直接滴定，只能在非水溶液中滴定

与铜盐反应

与钴盐反应

与汞盐反应

羟肟酸铁盐反应

专属反应

水，氢氧化钠，白色沉淀，加热--油状物--加热--蒸气（红色石蕊试纸变蓝）--盐酸--白色沉淀--过量溶解

氢氧化钠---乙醇--碘--黄色沉淀--碘仿臭气

沉淀--过滤--洗涤--干燥--测熔点

规定浓度的供试液在最大吸收波长，测定吸光度

盐酸布比卡因

盐酸普鲁卡因胺片

盐酸普鲁卡因的鉴别

盐酸丁卡因--对丁基苯甲酸

盐酸普鲁卡因--对氨基苯甲酸

盐酸氯普鲁卡因--4-氨基-2-氯苯甲酸

HPLC杂质对照品法

庚烷磺酸钠---中性粒子对，与非极性固定相作用强，改善分离效果

LC-MS

HPLC

主成分自身对照法

杂质对照品法

盐酸罗哌卡因的光学纯度检查

反应速度与药物结构的关系

加入适量KBr加速反应

酸的种类及其浓度

反应温度

滴定速度

永停滴定法

电位法

外指示剂法

内指示剂法

弱碱性

碳酸钠--碱性环境---生成钠盐溶解--硝酸银---生成可溶性一银盐--加入过量硝酸银---生成二银盐白色沉淀

吡啶溶液--碱性环境---烯醇式异构体与铜吡啶试液反应---有色配位化合物

巴比妥类药物呈紫堇色------含硫巴比妥呈现绿色

在碱性溶液中可与钴盐反应，生成紫堇色配位化合物

反应在无水条件下比较灵敏，生成的有色产物也比较稳定。

异丙胺---无水碱性环境

与硝酸汞或氯化汞溶液反应，可生成白色汞盐沉淀，在氨试液中分解

酸性条件下进行

丙二酰脲基团中的氨比较活泼，可与香草醛在浓硫酸存在下发生缩合反应，生成红棕色产物

巴比妥---香草醛--硫酸--水浴加热--红棕色----放冷--乙醇--紫色--蓝色

H--不含黏合剂

G--含黏合即

F--荧光

观察荧光淬灭

银盐反应

铜盐反应

硫代巴比妥类分子中含有硫元素--氢氧化钠--铅离子--生成白色沉淀--加热--沉淀转变为硫化铅--黑色沉淀-

可以供硫代巴比妥与巴比妥类鉴别

丙烯基--不饱和基团--发生加成反应--氧化反应

与碘试液的反应

与溴试液反应--溴褪色

与高锰酸钾的反应

硝基化反应

与硫酸-亚硝酸钠的反应

与硫酸-甲醛的反应

主要是控制副产物苯基丙二酰脲，产生原因是乙酰化不完全，

苯基丙二酰脲的酸性比苯巴比妥强，能使甲基橙指示剂呈红色

甲基橙的变色范围--3.2--4.4  红色--橙色-黄

取本品--加水--煮沸--放冷--滤过--滤液--甲基橙--不显红色

主要控制苯巴比妥中间体Ⅰ的量

杂质在乙醇溶液中的溶解度比苯巴比妥小

取本品---乙醇--加热回流--溶液澄清

控制中间体Ⅰ形成的酰胺，酰脲或分解产物等杂质

利用杂质和苯巴比妥在氢氧化钠试液和乙醚中的溶解性能不同

提取重量法

取本品--分液漏斗--氢氧化钠--水--乙醚--分层--乙醚层--水振荡洗涤3次--过滤--滤液--蒸干--滤渣不得过3mg

HPLC

辛烷基硅烷键合硅胶

供试品溶液

对照溶液

不加校正因子的主成分自身对照法

控制水不溶性杂质

司可巴比妥钠和杂质在水溶性上的差异

本品--水--溶液澄清

控制酰脲，酰胺类副产物

三硝基苯酚--沉淀，测熔点

奋乃静的火焰显绿色

氟取代基---有机破坏--酸性条件--茜素锆--红色变黄色

盐酸盐---硝酸与母核会发生氧化显色反应，影响观察，因此加入氨溶液，使碱性的酚噻嗪类药物沉淀后，在进行氯化物的沉淀检查

氯离子与二氧化锰等氧化剂的氧化还原反应用于鉴别酚噻嗪类药物的盐酸盐，会生成氯气，使 湿润的淀粉碘化钾试纸变蓝--母核与氧化剂的显色反应不会影响观察

通过比较最大波长，最小波长或吸收光谱的一致性进行鉴别，也可以比较其吸光度或吸收系数的比值来鉴别

绝大多数生物碱原料药都采用ir法鉴别

酸度

易氧化物

其他生物碱

水相的最佳ph值

酸性染料及其浓度

有机溶剂的选择

水分的影响

酸性染料中的有机杂质

碱性药物

酸性药物

具有还原性，与羰基试剂--四氮唑，多伦，斐林试剂--显色。四氮唑试剂--甲囋显色

与亚硝基铁氰化钠反应---蓝紫色

重氮苯磺酸--红色偶氮染料

硝酸银反应--白色炔银沉淀

氟原子

氯原子

先破坏--在反应

一般先水解，生成相应的羧酸--在鉴别

醋酸酯类--在硫酸存在条件下与乙醇形成乙酸乙酯，香气鉴别