分子手术刀：限制性核酸内切酶（限制酶）
存在：
主要从<b>原核生物</b>中分离纯化出来的
作用
<p>1·识别双链DNA分子<b>特定</b>的核苷酸序列（<u>切4.5.6.8刀</u>）2.切割每一条链上特定两个核苷酸之间的磷酸二酯键</p>
结果
粘性末端（中心轴线两侧
平末端（沿中心轴线处
关于酶切问题：
要想获得一段基因，必须用限制酶切2个切口，形成3个DNA片段，产生了4个末端（平末端或者粘性末端）
有可能<b>识别序列</b>相同，却切出<b>不同末端</b>
有可能<b>识别序列</b>不同，却切出<b>相同末端</b>
把两个来源不同的DNA片段用同种限制酶切割，会产生相同的粘性末端
拓展
注意：限制酶不能切割单链DNA和RNA，也不能识别
原核生物的限制酶不能切割自身DNA
没有识别序列
在<b>甲基化酶</b>的作用下，把甲基转移到碱基上（被修饰过
没有限制酶
原核生物中存在限制酶的意义
原核生物容易受到外源DNA的入侵，限制酶用于切割外源DNA，保证自身安全
<b>切割不消耗能量，但是连接需要消耗能量</b>
限制酶是一类酶，而不是一种酶
限制酶的切割位点应位于<b>标记基因之外</b>，不能破怀标记基因，以便于进行检测
分子缝合针：DNA连接酶
来源
E`coliDNA连接酶~大肠杆菌体内~用于连接粘性末端
T4DNA连接酶~噬菌体体内~连接粘性末端和<b>平末端（效率低些</b>
作用
形成磷酸二酯键（<b>没有特异性识别，但专一只连接DNA</b>
补充
分子运输车：基因进入受体细胞的载体
载体类型
最常用：质粒
概念
裸露的，结构简单的，独立于细菌拟核DNA之外的，并育有自我复制能力的很小的环装DNA分子
<h5>化学本质：<b><font color="#000000">DNA</font></b>（<u style="">没有蛋白质</u>，不同于载体！）</h5>
来源：只存在于<b style=""><font face="黑体" style="">细菌或酵母菌</font></b>中
复制
能在细胞中自我复制
整合到染色体DNA上，随染色体进行同步复制
<b style=""><font face="宋体"><u>被用于基因工程的质粒都是被人工改造过的</u></font></b>
入噬菌体的衍生物
动植物病毒
目的
1·用它作为<b><u>运载工具</u></b>，将目的基因转运到宿主细胞中
2·利用它在受体细胞内对目的基因进行<b><u>大量复制</u></b>
特点
要有一至多个限制酶的切割位点供外源DNA插入
含有复制原点，能在宿主细胞内自主复制（便于在宿主细胞中稳定存在）
含有特殊的标记基因，供重组DNA分子鉴定与筛选
对受体细胞无害
拓展
质粒与目的基因构建的重组基因，又叫做：重组DNA分子，基因表达载体
<b>质粒切一刀（而目的基因切两刀）</b>
<b><u>未处理的大肠杆菌不能作为受体细胞（吸收质粒的能力弱）</u></b>
