开题报告技术流程图
2022-03-25 11:02:26 1 举报登录查看完整内容
开题报告技术流程图，分子实验
作者其他创作
大纲/内容
预测错义突变的蛋白功能
突变功能预测
共聚焦
HaCaT细胞培养、传代，24H后转染
弃培养基，PBS洗，加RIPA裂解液后，用细胞刮刮下，BCA测蛋白浓度，加4倍体积Loading Buffer后煮蛋白，SDS凝胶电泳，转膜，封闭，洗膜，孵一抗MVD，洗膜，敷二抗，洗膜，显影
Auto Dock软件
细胞培养和转染
野生型MVD和突变型MVD质粒构建，E.coli转化，扩大培养后提取质粒，测量质粒浓度和纯度
siRNA由生物公司设计合成，配制储存液（siRNA+DEPC水成20μM），细胞计数后铺板，24h后按1：1用lipo3000转染siRNA入cell内
蛋白质半衰期实验
模拟二级结构
亚细胞定位
WB实验
Amexin-V FITC/PI双染技术，检测利用siRNA干扰MVD后细胞组和对照组的凋亡水平
质粒构建
SiRNA干扰
SIFT、PolyPhen-2软件
蛋白功能验证
流式细胞实验
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