Annexin V- FITC/PI双染流式细胞术
临床组织检测HE、IHC
ULBP3
MICA
TNF-α 等
HNSCC细胞
第三部分：研究NKT细胞及CAR-NKT细胞对HNSCC类器官的抗肿瘤作用
第一部分：NKG2DL靶点确立及CAR-NKT细胞的构建
疗效评估（类器官生长、结构完整性、细胞活性）
免疫相关因子表达
组织学与分子水平分析
IFN-γ
慢病毒的包装与生产
免疫因子检测与机制分析
疗效评估
全外显子测序（cWES）
HNSCC细胞系
嵌合抗原受体的构建与细胞制备
第四部分：探索NKT细胞及CAR-NKT细胞在体内的抗肿瘤活性
HNSCC类器官模型的制备与鉴定
直接接触共培养杀伤实验
间接共培实验：Transwell
ULBP2
肿瘤组织收集
数据库信息挖掘
表面标志物分析
慢病毒转导制备CAR-NKT细胞
ULBP1
细胞因子检测：IsoPlexis
V.S.
NKG2DL家族在HNSCC中高表达
免疫调节机制探索
组织学检测（HE、IHC ）
组织学检测（HE、IHC）
小鼠生存分析
MICB
靶向标志物NKG2DL的确定
PI单染流式细胞术
NKT细胞/CAR-NKT细胞
蛋白质及RNA的提取检测
肿瘤细胞效应检测
免疫效应与机制分析
免疫因子检测：如IFN-γ、TNF-α
异种移植模型HE、IHC
NKT细胞分离与转导
活化状态评估
小鼠肿瘤体积变化
实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)
小鼠皮下成瘤模型的构建
CCK8检测
NKT细胞的分离与筛选
细胞系验证WB、qPCR
外周血中PBMC样本采集
CAR表达率
患者来源原代肿瘤细胞PDCs
克隆纯化与扩增，建立细胞系
靶向NKG2DL的CAR质粒载体构建
高E:T
第二部分：比较NKT细胞与CAR-NKT细胞对HNSCC的细胞毒性作用
不同效靶比（E:T）梯度验证
共培养与抗肿瘤效应评估
流式细胞术检测CAR表达转导效率
低E:T
NKT/CAR-NKT细胞与PDO共培养
流式细胞术纯度检测
培养上清收集
细胞回输治疗与疗效评估
