探针杂交
预设探针+定制探针（不能单添加定制探针）
去掉一部分稀释buffer，与预设探针等体积添加即可
记录定制探针的ID 和相应slide NO.<br>
热盖50℃或是关掉热盖
杂交16-24 h
杂交后清洗<br>
取下卡夹，去掉盖子，去除杂交mix试剂<br>
如果有2个slide，先去除并添加试剂，再做第2个，避免slide干燥。<br>
立即加入500 ul PBS-T,室温孵育1min。去除PBS-T试剂
不要引入气泡
小气泡没有关系，不要吸或是戳破小气泡，容易导致脱片或是损失样本<br>
重复上一步 1次
加入500ul杂交后清洗buffer，盖盖并上PCR仪 37℃孵育30min
结束后立即进行下一步
连接
取下卡夹，去掉盖子，去除清洗buffer试剂
如果有2个slide，先去除并添加试剂，再做第2个，避免slide干燥。<br>
立即加入500 ul PBS-T,室温孵育1min。去除PBS-T试剂
重复上一步2次<br>
加入500ul 连接mix，盖盖并上PCR仪37℃孵育2h<br>
结束后立即进行下一步
扩增
取下卡夹，去掉盖子，去除连接mix试剂
如果有2个slide，先去除并添加试剂，再做第2个，避免slide干燥。<br>
立即加入500 ul PBS-T,室温孵育1min。去除PBS-T试剂
重复上一步2次<br>
加入500ul 扩增mix，盖盖并上PCR仪30℃孵育2h<br>
扩增后清洗
取下卡夹，去掉盖子，去除扩增mix试剂
加入500 ul TE,室温孵育1min。去除TE
重复上一步1次
加入500 ul TE
进行下一步或是保存
进行下一步<br>
安全停靠点：盖上盖子，4℃过夜或是不超过4天保存<br>
保存期间，不要开盖
自荧光淬火<br>
目的：减少由于醛固定、红细胞以及胶原蛋白/弹性蛋白结构造成的自发荧光
取下卡夹，去掉盖子，去除TE<br>
如果有2个slide，先去除并添加试剂，再做第2个，避免slide干燥。
加入1000ulPBS,室温孵育1min，去除PBS<br>
再重复上述步骤2次
500ul加入 稀释过的Reducing Agent B，盖盖，室温孵育10min。
取下卡夹，去掉盖子，去除Reducing Agent B<br>
加入1000ul 70%乙醇，等1min，弃掉。<br>
加入1000ul 100%乙醇，等1min，弃掉
重复上一步1次
立即加入500ul Autofluorescence Solution ，盖盖，<font color="#e74f4c">黑暗条件</font>下室温孵育10min<br>
去掉盖子，去除Autofluorescence Solution
加入1000ul 100%乙醇，等2min，弃掉<br>
再重复上一步2次
将卡夹放置于PCR仪上，进行37℃ 5min烘干，卡夹不盖盖子同时PCR仪不盖盖。<br>
不要干透
<font color="#e74f4c">立即</font>取下卡夹，并加入1000ul PBS重新水化组织，并<font color="#e74f4c">黑暗条件</font>下室温孵育1min。去除PBS<br>
加入1000ul PBS-T，<font color="#e74f4c">黑暗条件</font>下室温孵育2min<br>
可以进行拍照，以便对比组织形状判定是否有脱片<br>
保存或继续进行<br>
保存：安全停靠点，盖上盖子，4℃黑暗条件下保存不超过4天
保存期间，不要开盖
继续实验（推荐继续）
核染
去除PBS-T，加入500ul Xenium Nuclei Staining Buffer，<font color="#e74f4c">黑暗条件</font>下室温孵育<font color="#e74f4c">1min</font><br>
去除Nuclei Staining Buffer，加入1000ul PBS-T，<font color="#e74f4c">黑暗条件</font>下室温孵育1min
再重复上一步2次
加入1000ul PBS-T，保存或继续<br>
保存：安全停靠点，盖上盖子，4℃黑暗条件下保存不超过4天
保存期间不要开盖
继续进行实验<br>
什么核染染料？
