确定REV-ERBα的下游靶向基因
REV-ERBα与NF-κB/NLRP3的关联性
原代细胞分离培养
靶点解析
试验二：细胞水平研究炎症反应抑制“生物钟”的机理，验证REV-ERBα/NF-κB/NLRP3的表达模式
功能验证
JTK_CYCLE拟合
生物钟核受体REV-ERBα对SARA诱发的山羊瘤胃上皮炎症的作用及调控机制是什么？
Western Blot
ELISA
鲎实验法
血液及瘤胃液中LPS的浓度节律性
试验三：细胞水平揭示生物钟核受体REV-ERBα通过抑制NF-κB/NLRP3途径缓解瘤胃炎症的调控机制
试验一：动物水平确定“生物钟”与瘤胃炎症的关联性，研究REV-ERBα/NF-κB/NLRP3的表达模式
REV-ERBα/NF-κB/NLRP3的表达模式
生物钟及炎症因子基因的相关性；明确关键时间点
低精料日粮组（n=12）NFC/NDF=1.10
生物钟及炎症关联途径REV-ERBα/NF-κB/NLRP3的表达模式
JTK_CYCLE节律性分析
EMSA
高精料日粮组（n=12）NFC/NDF=2.30
偏相关性分析
屠宰后采集瘤胃上皮组织
构建过表达质粒
基于LPS建立ZT0~ZT24等7个时间点的瘤胃上皮细胞炎症模型
生物钟相关蛋白的表达水平
qPCR
关键时间点瘤胃上皮细胞炎症模型
REV-ERBα对于NLRP3启动子的调控机理
Pearson或Spearman相关性分析
ChIP-PCR
荧光素酶报告基因
生物钟及炎症因子基因的表达模式
启动子调控
CRISPR-Cas9
CT0~CT24等7个时间点采集血液及瘤胃液样本
血液及瘤胃上皮中炎症因子的浓度
明确SARA诱发的瘤胃炎症扰乱其内在“生物钟”系统的机理，阐明生物钟核受体REV-ERBα调控瘤胃炎症的作用机制；为牛羊瘤胃营养调控提供新的作用靶点
免疫组化
REV-ERBα对于p65启动子的调控机理
