稳转株生产流程
2025-11-08 14:07:56 0 举报jjjjj
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大纲/内容
单克隆扩培
检测结果出来之前需要维持96孔细胞生长
铺板Pool继续加药培养/若需交付则扩培冻存
转导/转染前拍照（100X）
单克隆铺板
转导/转染48h拍照（100x）
共转导单转对照需要单独药筛
冻存前拍照记录细胞状态
药筛结束
视细胞培养难度，至少铺2块96孔板
单克隆冻存交付
不交付pool者需冻存1管Pool备用
细胞活率检测（冻融后、重悬后）
药筛结束拍照（100x）
单克隆传出
降低药物浓度使细胞状态恢复
视检测结果，多冻存2个以上符合交付的克隆
重悬上清无菌检测
送检前拍照记录细胞状态
共转导/共转染需做单转对照
冻存前细胞送检支原体检测
传出后使用药筛减半浓度培养
冻存前培养上清送检无菌检测
送检细胞量5E5以上
细胞转导/转染
交付2个克隆需要送检6个克隆
送检RT-qPCR
Dox诱导检测（Tet on项目）
需要加药培养
收集部分细胞支原体检测
转导病毒MOI、转染质粒量留痕记录
提前建立药筛曲线
视细胞培养难度、至少传出12个克隆
单克隆送检
细胞复苏及QC
多药筛需做单独药筛对照
细胞铺板
48h后药筛
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