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稳转株生产流程

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稳转株生产流程

2025-11-08 14:07:56   5  举报

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稳转株生产流程

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大纲/内容

单克隆扩培

检测结果出来之前需要维持96孔细胞生长

铺板Pool继续加药培养/若需交付则扩培冻存

转导/转染前拍照（100X）

单克隆铺板

转导/转染48h拍照（100x）

共转导单转对照需要单独药筛

冻存前拍照记录细胞状态

药筛结束

视细胞培养难度，至少铺2块96孔板

单克隆冻存交付

不交付pool者需冻存1管Pool备用

细胞活率检测（冻融后、重悬后）

药筛结束拍照（100x）

单克隆传出

降低药物浓度使细胞状态恢复

视检测结果，多冻存2个以上符合交付的克隆

重悬上清无菌检测

送检前拍照记录细胞状态

共转导/共转染需做单转对照

冻存前细胞送检支原体检测

传出后使用药筛减半浓度培养

冻存前培养上清送检无菌检测

送检细胞量5E5以上

细胞转导/转染

交付2个克隆需要送检6个克隆

送检RT-qPCR

Dox诱导检测（Tet on项目）

需要加药培养

收集部分细胞支原体检测

转导病毒MOI、转染质粒量留痕记录

提前建立药筛曲线

视细胞培养难度、至少传出12个克隆

单克隆送检

细胞复苏及QC

多药筛需做单独药筛对照

细胞铺板

48h后药筛

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单PE数据生产流程

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原种生产流程

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地名地址数据生产流程图

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