“FBP-Fn-整合素”桥接模式验证（肠道上皮-免疫细胞共培养模型及抗体阻断实验）
最终成果：1.系统阐明FBP激活黏膜免疫的分子机制；2.明确FBP-抗原耦联与纳米递送的构效关系；3.获得高效候选疫苗原型，为后续研发奠定基础。
口服纳米疫苗构建与免疫（基于阶段二筛选的最优FBP-抗原复合物开展）
单独抗原组
阶段四：口服免疫效果的系统评价与保护效力验证
获得系列重组表达质粒
体内确证“双信号轴”比较野生型与突变体组保护效力差异
分目标与科学问题对应的达成
靶点鉴定与验证实验
攻虫保护与机制确证
达成分目标2阐明抗原呈递增效机制，优化纳米制剂配方
黏膜免疫：sIgA，PPs中Tfh/GC B细胞
对应Q3：构效关系CD/荧光光谱分析构象与表位可及性
信号机制验证实验
总体目标：阐明FBP介导的黏膜免疫激活机制，为研发新型口服疫苗奠定理论与实验基础
阶段三：基于受体-配体互作的黏膜免疫激活机制研究
核心机制确证
对应Q3：佐剂功能SPR分析FBP-抗原/TLR4互作动力学
对应Q2：靶点层肠道黏膜特异性作用靶点鉴定
多层次免疫应答检测
系统免疫：血清IgG及亚型，脾细胞因子（ELISpot/ICS）
监测病变与荷虫量
达成分目标1阐明抗原-佐剂耦联机制，筛选最优复合物
阶段二：蛋白表达纯化与“自佐剂”特性多维性表征
理性设计
下游信号通路解析（抑制剂/siRNA阻断MyD88/NF-κB 与FAK/PI3K通路）
链接方式变量（3‘端/5’端/双端）
对应Q1：机制层双信号轴激活机制验证（通过通路抑制剂、siRNA或基因敲除细胞系，阻断MyD88/NF-κB与FAK/PI3K通路）
空白对照
“自佐剂”特性深度解析
构建多策略对比体系
重组蛋白表达与纯化
野生型FBP-抗原组
回答核心科学问题Q1机制/Q2靶点/Q3功能
递送稳定性模拟胃肠液稳定性评估（为后续纳米载体包埋及口服递送筛选适配的蛋白构型）
阶段一：载体理性设计与构建
SPR/MST验证互作亲和力与动力学
免疫应答分析
