阶段三：动物模型中 microRNA 的肾保护作用验证
动物干预
糖尿病肾病相关 microRNA 调控机制研究技术路线图
检测技术
尾静脉注射给药microRNA 类似物脂质体包装载体长期跟踪观察
肾功能指标检测组织病理学分析电镜超微结构分子表达检测
功能评价
血肌酐、尿素氮水平蛋白尿定量分析肾小球硬化评分间质纤维化程度
早期诊断价值病情进展预测治疗效果评估个体化治疗指导
研究对象：糖尿病肾病患者队列（n=200），不同分期患者，随访数据
阶段四：microRNA 作为生物标志物的临床价值评估
基础筛选
队列研究
机制研究
统计分析
体内验证
分期患者样本收集纵向随访调查治疗反应监测预后指标记录
临床关联
ROC 曲线分析相关性分析多因素回归生存分析
研究思路
临床应用
研究对象：糖尿病肾病患者血清 / 尿液样本（n=80），健康对照组（n=40）
阶段一：糖尿病肾病关键 microRNA 的筛选与鉴定
样本收集
检测方法
血清 RNA 提取尿液外泌体分离RNA 质量控制临床资料收集
microRNA 芯片分析高通量测序qRT-PCR 验证生物信息学分析
筛选目标
差异表达 microRNA靶基因预测分析信号通路富集候选分子筛选
研究对象：SW480/SW620 细胞、BALB/c-nu/nu 裸鼠（6-8 周龄雄性）
阶段二：microRNA 调控肾脏纤维化的分子机制研究
研究对象：db/db 糖尿病小鼠，STZ 诱导糖尿病大鼠模型
细胞模型
分子技术
高糖损伤模型microRNA 转染抑制剂处理纤维化诱导
双荧光素酶报告Western blot免疫荧光染色ChIP-seq 分析
机制解析
靶基因直接结合验证TGF-β 信号通路调控纤维化标志物变化细胞凋亡与增殖
