microRNA 芯片分析高通量测序qRT-PCR 验证生物信息学分析
体外细胞编辑效能验证
应用拓展与未来展望
多疾病适应症拓展联合治疗策略开发个体化精准治疗探索
临床方案设计伦理与监管申报IIT 研究、IND 申报
早期诊断价值病情进展预测治疗效果评估个体化治疗指导
GLP 合规性研究生产工艺开发质量控制与标准建立
临床转化评估
筛选目标
CRISPR 载体系统优化
系统优化
治疗探究
CRISPR 优化与精准基因治疗技术路线图
优化 Cas 蛋白结构，提升靶向识别特异性
阶段四
临床转化与应用探索
04
高糖损伤模型microRNA 转染抑制剂处理纤维化诱导
阶段四：microRNA 作为生物标志物的临床价值评估
Cas 蛋白筛选与改造sgRNA 设计与优化载体组装与验证
体系筛选
靶向递送载体修饰，优化体内给药方式
阶段四：动物模型药效学与毒理学评价
机制解析
研究目标：推动技术临床转化与应用潜力评估
研究目标：验证优化系统在体外细胞中的编辑效率与安全性
脂质 / 病毒介导载体导入目标细胞
研究目标：评估体内编辑效率、治疗效果与安全性
疗效与安全性评估
阶段三
转染优化载体NGS 测序WGS 全基因组测序
动物模型验证与优化
载体构建
03
安全评测
研究对象：化合物数据库，先导化合物，结构衍生物
研究对象：SW480/SW620 细胞、BALB/c-nu/nu 裸鼠（6-8 周龄雄性）
肿瘤体积测量生存分析组织病理检查免疫指标检测
数据建模分析最优载体筛选优化方案确定
01
阶段一
阶段一：糖尿病肾病关键 microRNA 的筛选与鉴定
细胞模型构建
方案汇总
研究目标：构建并优化高效、低脱靶的 CRISPR 载体系统
筛选代表性人源细胞建疾病相关细胞模型确认靶点表达水平
02
阶段三：动物模型中 microRNA 的肾保护作用验证
研究对象：db/db 糖尿病小鼠，STZ 诱导糖尿病大鼠模型
CRISPR 基因编辑技术优化及疾病精准靶向治疗研究
结合自由能计算量子化学计算构效关系分析药物相似性评估
递送方式优化体内编辑效率检测组织分布与表达分析
载体初筛检测
脱靶效应评估编辑效率检测载体水平细胞初筛
研究思路
X 射线晶体学冷冻电镜NMR 波谱分子动力学模拟
动物模型构建
靶点发现
研究对象：糖尿病肾病患者血清 / 尿液样本（n=80），健康对照组（n=40）
阶段一：免疫检查点 PD-L1 蛋白结构与功能域分析
结合位点识别关键氨基酸筛选蛋白 - 蛋白相互作用构象变化分析
分子对接筛选药效团模型ADMET 预测先导化合物选择
构建疾病动物模型确认靶点致病表型分组与对照设计
表型恢复分析细胞功能检测安全性与毒性评估
研究对象：遗传性疾病靶点、病变组织体细胞
统计分析
阶段三：化合物体外抗肿瘤活性与机制研究
功能验证
阶段二
临床应用
载体转染
效果评估
药物设计
活性评价
安全评估
span style=\"font-size:14px; font-family:微软雅黑; color:#191919; letter-spacing:0px;\
样本收集
阶段四：CRISPR 技术落地精准疾病治疗探究
阶段二：基于结构的小分子抑制剂虚拟筛选与优化
临床前研究
评估脱靶风险，完善临床前安全评价
动物干预
重组载体测序、酶切，完成质粒质控鉴定
表型改善评估组织病理学分析长期安全性观察
载体优化
基因编辑与检测
总结方案，搭建精准基因治疗应用思路
体内递送及编辑检测
筛选编辑效率最优的改良 CRISPR 体系
组织检测
活体注射 CRISPR 制剂，分周期饲养观测
糖尿病肾病相关 microRNA 调控机制研究技术路线图
靶点筛选
体内验证
研究对象：肿瘤移植小鼠模型，SD 大鼠，药代动力学评估
MTT/CCK-8 检测流式细胞术ELISA 细胞因子Western blot
机制研究
血清 RNA 提取尿液外泌体分离RNA 质量控制临床资料收集
IC50 值测定选择性指数计算信号通路阻断免疫应答增强
活体给药
安全性评价
急性毒性试验脏器功能评估血液学指标最大耐受剂量
动物给药
肿瘤移植造模多剂量给药给药途径优化药代动力学
虚拟筛选
计算化学
化合物优化
结构修饰策略合成路线设计化学合成化合物表征
检测技术
Cas
活性检测
研究对象：多种肿瘤细胞系，正常细胞对照，免疫共培养系统
细胞实验
细胞增殖抑制细胞凋亡诱导免疫激活实验T 细胞功能恢复
重组蛋白表达蛋白纯化质量控制检测活性验证
抗肿瘤药物研发技术路线图
蛋白制备
结构解析
5 份模板（复古-古老风）生物医学 领域课题研究 / 技术路线图
细胞模型
功能研究
研究对象：Cas 核酸酶、靶向向导 RNA、工程化质粒载体
基础筛选
队列研究
研究对象：人源原代细胞、致病基因突变型细胞株
基于编辑数据梳理疾病靶向治疗靶点
动物试验
血肌酐、尿素氮水平蛋白尿定量分析肾小球硬化评分间质纤维化程度
靶基因直接结合验证TGF-β 信号通路调控纤维化标志物变化细胞凋亡与增殖
制剂优化
ROC 曲线分析相关性分析多因素回归生存分析
多靶点 sgRNA 模块化载体骨架构建
阶段二：体外细胞模型基因编辑效果评测
检测方法
尾静脉注射给药microRNA 类似物脂质体包装载体长期跟踪观察
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效率检测
细胞验证
阶段二：microRNA 调控肾脏纤维化的分子机制研究
PCR 与测序检测基因组定点编辑效率
研究对象：基因缺陷型模式小鼠、病变靶组织细胞
临床关联
5 份模板（柔和-淡雅风）生物医学 领域课题研究 / 技术路线图
质粒质控
分子技术
阶段一：CRISPR-Cas 编辑系统载体优化改造
分期患者样本收集纵向随访调查治疗反应监测预后指标记录
研究对象：糖尿病肾病患者队列（n=200），不同分期患者，随访数据
差异表达 microRNA靶基因预测分析信号通路富集候选分子筛选
5 份模板（冷色-柔和风）生物医学 领域课题研究 / 技术路线图
阶段三：活体动物体内靶向基因编辑实验
酶体改造
功能评价
取材检测组织基因修正与病理改善情况
双荧光素酶报告Western blot免疫荧光染色ChIP-seq 分析
肾功能指标检测组织病理学分析电镜超微结构分子表达检测
sgRNA
5 份模板（柔和-轻柔风）生物医学 领域课题研究 / 技术路线图
