第一部分：体外衰老模型的建立
② AGEs诱导衰老处理
浓度梯度筛选 + 时间点优化
③ 检测衰老指标，确定最佳造模条件
细胞外基质蛋白MMP-1（WB）
衰老相关β-半乳糖苷酶(染色实验）
衰老相关蛋白（p16/p21，Western Blot）
第二部分：BMSC干预策略
两种干预方案并行
条件培养基（BMSC-CM）处理
BMSC-CM处理衰老成纤维细胞
检测衰老相关指标的改善情况
细胞周期（流式）
EDU检测（荧光染色)
炎症指标检测（QPCR）
衰老相关蛋白（p16/p21，Western Blot）
第三部分：机制探索
DCFH-DA探针 揭示BMSC改善衰老细胞的应激水平
① 凋亡通路验证
凋亡率（流式Annexin V/PI）
凋亡相关蛋白（Cleaved-Caspase3/Bax/Bcl-2）
② 铜死亡通路验证
线粒体形态与功能（JC-1/TEM）
铜离子含量检测
FDX1/DLAT/LIAS（Western Blot）
特异性抑制剂（TM）阻断实验
第四部分：动物实验
Masson染色（胶原纤维排列与密度）<br><br>
SA-β-gal染色（组织衰老水平）
衰老相关蛋白（p16, p21）
铜死亡相关蛋白（FDX1, DLAT） 凋亡相关蛋白（Cleaved-Caspase3）
