结论：解除 Caspase-8 封锁可诱导肺癌细胞免疫原性坏死性凋亡（1）课题从 “机制研究” 拔高到了 “免疫治疗潜力” 的层面：（2）证明干预方式，不只是 “杀死癌细胞”，而是能启动机体的抗肿瘤免疫，让死亡的癌细胞成为 “肿瘤疫苗”，具备长期的抗肿瘤效果。
CRT 暴露检测（免疫荧光）（1）CRT（钙网蛋白）平时在细胞内质网里，ICD 发生时会快速转位到细胞膜表面，相当于在癌细胞表面插上了 “来吃我” 的标签。（2）这是 DC 细胞识别、吞噬死亡肿瘤细胞的关键信号。（3）用免疫荧光能直接在显微镜下看到 CRT 是不是跑到细胞膜上了，是 ICD 的标志性特征。
ELISA 测 HMGB1、ATP 释（DAMPs 检测）span style=\"font-weight: normal;\
与 DC 共培养，检测 DC 成熟（CD80/CD86）（1）这是 ICD 的功能性验证：如果死亡的癌细胞释放了足够的 DAMPs 和 “eat me” 信号，DC 细胞就会被激活、成熟，高表达 CD80/CD86 这些共刺激分子。（2）成熟的 DC 会把肿瘤抗原呈递给 T 细胞，启动后续的抗肿瘤免疫反应。（3）这一步直接证明：诱导的细胞死亡，真的能激活下游的免疫应答，而不是单纯的细胞死亡。
确认死亡为PIPK3依赖的坏死性凋亡可以确认：我们观察到的死亡，确实是依赖 RIPK3 的坏死性凋亡通路介导的。因为当通路的 “核心开关”PIPK3 阻断，细胞就不死了，这就坐实了因果关系。
否
是
免疫原性评估这种坏死性凋亡，能否让癌细胞变成 “免疫原性死亡（ICD）”，也就是能否释放信号，唤醒免疫系统来攻击肿瘤。
排除假说检测其他通路假说不成立：细胞死亡可能不是通过RIPK3 通路，而是其他通路（比如 RIPK1 非依赖的坏死性凋亡、或者凋亡 / 焦亡）导致的。
细胞死亡是否减弱？
加入PIPK3抑制剂GSK872或siPIPK3(通过 “功能阻断” 验证)
依赖性验证（避免\"假阳性\"结果）在细胞死亡研究里，只看表型很容易 “假阳性”比如 LDH 释放、PI 染色，只能说明细胞膜破了，但不能区分是程序性坏死、还是毒性导致的非特异性坏死哪怕 WB 看到 p-MLKL，也可能只是细胞应激的 “伴随现象”，不是真正的死亡原因。而通过 “抑制核心分子后，表型消失这种功能获得 / 丧失实验”，就能把 “巧合” 排除掉，让实验结论从 “可能相关” 变成 “明确的因果关系”，这也是课题设计里逻辑严谨性的体现。
