650载体杀菌试验

无菌试管内，5ml中和产物（5ml中和剂+1片抗菌样片，20℃恒温器恒温10min后），加入1片染菌对照片，作用10min

步骤五：中和剂鉴定试验 

无菌平皿内，用无菌镊子取3片试验样片，勿重叠，20℃恒温器恒温5min后

5ml中和剂+1片染菌样片

试验组

注：中和剂用PBS配制。PBS的配制：无水磷酸氢二钠2.83g+磷酸二氢钾1.36g+蒸馏水1000mL，再调节PH至7.2，于121℃压力蒸汽灭菌20min。

阴性对照组

步骤三：洗菌梯度及适用菌株范围（回收菌落数：1.0×10^4CFU/片～9.0×10^4CFU/片）大肠杆菌 8099：3-8代，4.5mL-5mLPBS冲洗斜面，稀释4个1：9；金黄色葡萄球菌ATCC6538：3-8代，4.5mL-5mLPBS冲洗斜面，稀释3个1：9，再1：3；白色念珠菌 ATCC10231：3-6代，1.5mL-2mLPBS冲洗斜面，稀释2个1：9，再1：2；或根据抑菌剂特定用途所用的其他菌株。

步骤一：试验菌株需前一天划菌培养18-24h。接种时，呈Z字型划线，线条数量为75条左右，均匀排列于斜面培养基上。大部分细菌接种于营养琼脂上，白色念珠菌接种于沙氏琼脂上。

加入2片染菌载体

步骤六：载体杀菌试验

作用10min后，振荡将试验菌洗下，分别吸取1ml样液接种于2个平皿中，活菌培养计数（如生长菌数过多可用PBS进行10倍系列稀释）

阳性对照回收菌量为1.0×10^4CFU/片～9.0×10^4CFU/片试验重复3次，计算杀菌率X=(A-B)/Ax100%（X—杀菌率，%；A—对照样品的回收菌量，单位为 CFU/片；B—试验样本回收菌量，单位为 CFU/片）

无菌试管内，5ml中和剂20℃恒温器恒温5min后，加入1片染菌对照片，作用10min

第1、2、3组有相似量试验菌生长，且菌量在1.0×10^4CFU/片～9.0×10^4CFU/片；计算组间菌落数误差率，其组间菌落数误差率应不超过15%；第4组无菌生长，否则，说明试剂有污染，应更换无污染的试剂重新进行试验。试验重复3次，每次试验均应符合以上要求。 

第3组

取与试验样品同质材料不含抗菌成分的对照样品代替抗菌样品浸泡

第2组

第4组

取同批次稀释液、中和剂、培养基作阴性对照

WS/T650-2019抗菌和抑菌效果评价方法    5.2.3载体杀菌试验

阳性对照组

第1组

温馨提示：实验室耗材均在523房间储存，常用试验菌株保存于516冰箱，常用培养基及常用试剂在524房间储存

说明书规定时间的杀菌率≥90%，判有抗菌作用；说明书规定时间的杀菌率≥99%，判有较强抗菌作用

计时时间为说明书最短时间T，指定最短时间的0.5倍-0.5T，指定最短时间的1.5倍-1.5T

       选择原则：抗菌类产品选择抗菌效果评价方法。液体抗菌产品选择悬液定量杀菌试验，凝胶状或膏状抗菌品选择载体浸泡定量杀菌试验，湿巾类或其他自身含有抗菌成分的产品选择载体杀菌试验，含有可溶性抗菌成分的纺织品选择浸渍抗菌试验。含有不可溶抗菌成分的纺织品、无纺布、纤维等，经鉴别不含可溶性抗抑菌成分后，采用烧瓶振荡试验。含有不可溶抗菌成分的瓷砖、塑料、金属、涂料等，采用贴膜试验；对于涂于表面，干燥后具有持续抗菌作用的产品，进行持续抗菌试验。       适用范围：适用于添加有杀菌剂的卫生湿巾或可溶性抗菌物质的载体类产品的抗菌性能效果的鉴定。

分别用中和剂、中和产物、PBS做10倍稀释，选适宜稀释度，分别吸取1ml接种于2个平皿中，做活菌培养计数

细菌用营养琼脂在36℃培养48h，霉菌用沙氏琼脂36℃培养72h

在每一样片上滴加0.1 mL试验用菌悬液，立即计时。此为染菌样片，作用至相应时间后

分别吸取稀释液（PBS）、中和剂各1.0 mL于同一无菌平皿内，倒入上述试验同批次的培养基15 mL～20 mL，作为阴性对照组培养观察

试验菌株洗菌过程：试验菌株为18h-24h新鲜斜面培养物。将新鲜的斜面培养物用PBS洗下后稀释至约1.0×10^5CFU/mL～ 9.0×10^5CFU/mL，作为菌悬液。

无菌试管内，5mlPBS20℃恒温器恒温5min后，加入1片染菌对照片，作用10min