650抑菌效果2
2022-01-10 10:32:52 0 举报WS/T650-2019抗菌和抑菌效果评价方法
作者其他创作
大纲/内容
试验成立条件要求：“0”接触时间对照织物的平均回收菌量为1×103CFU/mL～5×103CFU/mL；阴性对照应无菌生长，阳性对照菌数比0接触时间的菌数明显增加。各次试验的抑菌率均≥50%，即可判定该样片具有抑菌作用。
分别取1 mL菌悬液加入2份准备好的锥形瓶内试样和1份对照织物上，确保其均匀分布，且锥形瓶中不留多余液，封好瓶口，以防蒸发造成细菌死亡。分别在一个盛有已接种菌悬液的试样和对照织物的锥形瓶中加入100mLPBS，振荡1min洗涤细菌，分别吸取1mL样液或10倍系列稀释液接种2个平皿，作为“0”接触时间样本和对照织物上的细菌数。
调整阶段：试验开始前7d至14d， 受试者使用不含抗（抑）菌成分的香皂、洗发水和沐浴液进行日常的洗手、洗澡，此阶段持续至少7d，但不超过14d。
X=(A-B)/Ax100% 式中：X--抑菌率%；span style=\"font-size: inherit;\
以试验同批次的稀释液、培养基等分别设阴性对照。
滞留抑菌试验
封包:细菌接种后立即用小塑料碗扣于染菌区上面 ，再用胶带将小塑料碗固定在皮肤上，记录封包的时间。
阴性对照组，试样不接种菌悬液，在“0”接触时间加入100mLPBS，振荡1min取样，接种平皿。
实验区试验后的消毒处理:对抑菌样品组清洗后的实验区采样之后，用70%的酒精对实验区进行消毒。然后对对照组清洗后的实验区以同样方法进行采样、消毒。实验结束后，用皮肤消毒剂对两只前臂进行消毒处理，处理后清水冲洗，擦干，再涂少量的抗生素软膏。
阳性对照组，另取1个装有对照织物的锥形烧瓶，接种1 mL菌悬液后，在36℃培养20h，加入100mLPBS，振荡1min，分别吸取1mL样液或10倍系列稀释液接种2个平皿
用接种环将保存的菌种以划线法接种到营养琼脂平板，36℃培养24h，取典型的菌落移种到含肉汤培养基的锥形瓶中，36℃培养24 h，用肉汤对培养液进行系列稀释，使菌悬液的含菌量为1.0×105CFU/mL～5.0×105CFU/mL。
每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1 片阴性对照样片，共5片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面，阴性对照样片贴于平板中心位置，试验样片贴于四周，贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。各样片中心之间相距25 mm以上，与平板的周缘相距15 mm以上。盖好平板，置36℃±1℃培养16h～18h观察结果，试验重复3次。
适用范围：适用于含溶出性抑菌物质，可制成直径为5 mm片状物的固体抑菌产品的抑菌效果鉴定；也可用于鉴别抗抑菌样品中是否含有可溶性抑菌物质。
适用范围：适用于溶出性抑菌织物（如抑菌毛巾、口罩、内衣等）抑菌效果的测定。
各次试验阴性对照菌无菌生长。实验不得少于16人次，抑菌率均≥ 50%，可判定该产品在规定的时间内有滞留抑菌作用。
用PBS将试验菌24h新鲜斜面培养物稀释至约5×105 CFU/mL～5×106 CFU/mL菌悬液备用
浸渍抑菌试验
36℃培养16-18h
选择原则：抑菌类产品选择抑菌效果评价方法。液体抑菌产品选择悬液定量抑菌试验，膏体或半固体凝胶类、黏稠状抑菌产品选择载体浸泡定量抑菌试验，湿巾类或其他自身含有抑菌成分的产品选择载体抑菌试验，肥皂类固体抑菌产品选择抑菌环试验，含有可溶性抑菌成分的纺织品选择浸渍抑菌试验，含有持续抑菌作用的抑菌洗液选择滞留抑菌试验。
接种与培养:对每一个取样进行接种，以0.0375 mol/L磷酸盐缓冲液对样品进行10倍系列稀释，选适当稀释度取0.1mL接种于2个含5%羊血的TSA平板表面，用玻璃弯棒涂匀
将另一个装有已接种菌悬液试样的锥形瓶于36℃培养20h，加入100mLPBS，振荡1min洗涤细菌，分别吸取1mL样液或10倍系列稀释液接种2个平皿，作为试验组。
试验重复3次，计算抑菌率X={B或C或[(B+C)/2]}/{B或C或[（B+C)/2]}式中：X—抑菌率，%；A—试验组试样上的细菌数，单位为 CFU/mL；B—“0”接触时间试样上的细菌数，单位为 CFU/mL；C—“0”接触时间对照织物上的细菌数，单位为 CFU/mL；如果“B”和“C”差别较大时，取较大值；如果“B”和“C”差别不大时，取平均值。
用游标卡尺测量抑菌环的直径（包括贴片）并记录，测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行，测量其直径应以抑菌环外沿为界。
适用范围：适用于有持续抑菌作用的抑菌洗液类抑菌产品的滞留抑菌效果鉴定。
取同种材质不含抑菌成分的样本，制成与试验组大小相同的圆片（块）
注：实验室耗材均在523房间储存，常用试验菌株保存于516冰箱，常用培养基及常用试剂在524房间储存
取在36℃的条件下培养20h的金黄色葡萄球菌第3代培养物。用TSB适当稀释菌悬液，使菌悬液浓度约为108CFU/mL～109CFU/mL
抑菌效果WS/T650抗菌和抑菌效果评价方法 抑菌效果
36℃培养48h
抑菌环试验
用无菌棉拭子蘸取浓度为5.0×105CFU/mL～5.0×106CFU/mL试验菌悬液，在适宜的培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥5min。
接种: 在受试者每只前臂中间部位（不要在手腕和肘皱褶处），用带有印墨直径为3cm的玻璃量筒扣在皮肤上，划分出一个试验区。使用加样器取10μL上述菌悬液，接种于前臂试验区（菌落数为106CFU/试验区～107CFU/试验区），用一次性接种环，把接种物涂成一圆形，使其与试验区边缘应有4 mm～5 mm的距离。
阴性对照样片应无抑菌环产生，试验样品抑菌环直径＞7 mm者，判为有抑菌作用；抑菌环直径≤7 mm者，判为无抑菌作用。3次重复试验（共12个样片）均有抑菌作用，则判为合格。
溶出性固体抑菌产品，直接制成直径为5 mm，厚度不超过4 mm圆片（块），每4片为一组。
在距试样布边10 cm以上、离布端1 m以上部位，剪取直径为5 cm的圆形试样若干，取3份试样分别装于3个锥形瓶中，盖好瓶口备用（需用试样数量要根据纤维类别及织物织法而定，以能吸收1 mL菌液且锥形瓶中不留残液为度）。另同法剪取与试样相同材质但不含抑菌剂对照织物若干，取2份分别装于2个锥形瓶中，盖好瓶口，121℃灭菌15min备用。
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