24h尿蛋白定量尿白蛋白/肌酐比值 (UACR)
(贯穿体内外)
WB/qPCR
组织病理学
信号轴活性与必要性验证
体内实验
蛋白表达
ELISA/生化分析
空间定位与干预
形态学观察
机制
血清检测
信号轴机制与功能验证 (第4-8周)
转化应用探索
实验分组
药效比较
为药食同源中药防治DKD提供新靶点实验依据
核心信号轴验证
结论与产出
模型与分组
必要性验证
生化分析
科学意义
尿液检测
6组对照
PAS染色 (系膜基质)透射电镜 (足突融合率)
MPC-5小鼠足细胞
靶点
组织病理与分子检测 (第14-15周)
学术论文
Western Blot检测
总黄酮部位 vs. 总多糖部位
动物模型
青钱柳减轻DKD足细胞损伤恢复肾小球滤过屏障减少蛋白尿
CCK-8测细胞活力，确定安全浓度流式细胞术(Annexin V/PI)检测凋亡TUNEL法检测凋亡
免疫荧光与回补实验
细胞模型与药效初筛 (第1-3周)
活性部位
药效确认
细胞活性与凋亡
转化目标
发表1-2篇学术论文
现象
模型构建及分组干预 (第1-5周)
功能保护指标
体内实验 | 体外实验
PTGS2/EP4是青钱柳保护足细胞的关键分子靶点
体外核心模块
EP4与足细胞骨架蛋白(Synaptopodin)共定位EP4拮抗剂干预后观察CP效应PTGS2 siRNA转染后观察CP效应
肾功能动态监测 (第6-13周)
空间共定位
体外实验
分子机制检测
DKD早期辅助干预天然药物候选物
免疫荧光
最终成果产出
ELISA检测肾脏/细胞PGE2含量qRT-PCR检测PTGS2、EP4 mRNA水平
C57BL/6小鼠
高糖(30mM)诱导损伤正常糖(NG)、等渗(NG+Man)、高糖(HG)对照CP低、中、高剂量组(CP-L/M/H)
信号轴检测
研究结论
血清肌酐 (Scr)尿素氮 (BUN)
高脂饲料+STZ诱导DKD模型n=8/组每日灌胃，连续8周
青钱柳 vs. 阳性药(赖诺普利/达格列净)
PTGS2 (COX-2)蛋白/mRNAEP4受体蛋白/mRNA
抑制PTGS2/PGE2-EP4信号轴异常激活减少足细胞凋亡
PTGS2(COX-2)在足细胞(WT-1+)中的表达
