核心结论
血糖、HbA1cTG、TCScr、BUNUACR
CCK-8检测细胞活力Hoechst/流式细胞术测凋亡免疫荧光EP4与Synaptopodin共定位
PTGS2、EP4蛋白/mRNAPGE2水平(ELISA)凋亡蛋白Caspase-3、Bax/Bcl-2炎症因子IL-6、TNF-α氧化指标SOD、MDA
体外实验：足细胞损伤模型
ANOVA，P<0.05为显著
统计分析软件
大创项目结题报告SCI学术论文撰写与投稿申请国家发明专利
细胞模型建立与功能检测
分子表达
模型分组 | 指标检测 | 机制推导
尿液：24h尿蛋白、UACR、尿Nephrin血清：血糖、血脂、Scr、BUN、胰岛素肾组织：病理切片、蛋白/核酸样本
PTGS2 siRNA沉默
qRT-PCR检测相关基因Western blot检测蛋白ELISA检测PGE2与炎症因子
信号轴与分子机制
EP4受体拮抗
模型建立 | 分组设计 | 干预方案
巨噬细胞极化流式分析CD86(M1)/CD206(M2)标记探讨炎症调节作用
文献调研
材料与平台准备
肾功能与代谢
动物模型构建与干预
研究成果转化与输出
实验构建与机制验证
模型与分组
细胞模型
HRGEC常规培养、THP-1诱导为巨噬细胞
体内实验：DKD小鼠模型验证
GraphPad Prism
多维度指标检测与分析
巨噬细胞：炎症因子PGE2、IL-6；PTGS2、CD86、CD206 mRNA
靶点阻断与基因沉默实验
青钱柳相关保健产品开发建议DKD治疗新靶点转化医学研究后续深入研究方向规划
机制整合与成果输出
HE/PAS染色与评分肾小球硬化指数WT1免疫组化电镜足突融合率Nephrin/Podocin表达
NC、HG、MA、HG+Cele、HG+PGE2、HG+Cele+PGE2
机制验证
样本采集
内皮细胞：细胞活力；炎症因子PGE2、IL-6；PTGS2 mRNA
足细胞培养与分化高糖(30mM)损伤模型渗透压对照组青钱柳含药血清干预
青钱柳→抑制PTGS2/PGE2-EP4轴→减轻足细胞凋亡与肾脏炎症→保护DKD
前期研究准备与理论框架
信号轴必要性验证
统计方法
验证高糖激活PTGS2/PGE2-EP4轴，导致内皮细胞损伤、巨噬细胞M1极化；塞来昔布可阻断该轴；外源PGE2可逆转塞来昔布作用
免疫微环境检测
指标检测
细胞功能
Db/db小鼠模型+高脂诱导
正常对照组 DKD模型组青钱柳低/中/高剂量组达格列净阳性药组塞来昔布组
青钱柳药理作用研究DKD足细胞损伤机制PTGS2/PGE2-EP4信号轴功能现有治疗靶点与药物
青钱柳水提物与含药血清制备试剂、细胞系、实验动物SPF级动物房与细胞培养室分子生物学检测平台
模型构建 | 功能评估 | 分子检测
补充实验
研究基础与假说构建
肾脏病理与足细胞
PTGS2 siRNA转染检测沉默后青钱柳作用变化确认PTGS2的上游关键地位
青钱柳抑制PTGS2/PGE2-EP4轴减轻足细胞凋亡与炎症延缓糖尿病肾脏疾病进展
科学假说
灌胃干预8周后
数据整合与机制证实
应用展望
学术成果
