微生物的实验室培养
2020-03-24 12:02:25 1 举报AI智能生成
生物选修1微生物的实验室培养思维导图
作者其他创作
大纲/内容
培养基
营养成分
碳源、氮源、水、无机盐、生长因子等
条件
也要满足微生物生长的pH、特殊营养物质和氧气等要求
种类
按物理性质
固体培养基（加入了琼脂）
微生物的分离、计数等
半固体培养基（加入了一定比例的琼脂）
观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等
液体培养基（不加琼脂）
工业生产，连续培养
按目的用途
选择培养基
目的
培养、分离出特定的微生物
举例
加入青霉素，分离酵母菌和霉菌
以尿素为唯一氮源，分离尿素分解菌
鉴别培养基
目的
鉴别微生物种类
举例
加入酚红指示剂，鉴别尿素分解菌
加入伊红美蓝，鉴别大肠杆菌
按化学成分
合成培养基
菌种分类、鉴定
天然培养基
工业生产
常见培养基
牛肉膏蛋白胨培养基
培养细菌
营养琼脂培养基
培养细菌
伊红美蓝培养基
检测水中大肠杆菌的含量
无菌技术
关键
防止外来杂菌的入侵
消毒
概念
使用较为温和的物理化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，不包括芽孢和孢子
方法
煮沸消毒法
100℃，5~6min
举例
烧开水
巴氏消毒法
70~75℃+30min 或80℃+15min
举例
牛奶
化学药剂消毒法
酒精擦拭双手；氯气消毒水源；喷洒石碳酸或煤酚皂溶液
物理消毒
紫外线消毒
灭菌
概念
用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子
方法
灼烧灭菌
在酒精灯的充分燃烧层灼烧
举例
接种环、接种针、试管口、瓶口等
干热灭菌
干热灭菌箱，160~170℃，1~2h
举例
玻璃器皿、培养皿、金属用具等耐高温、要保持干燥的物品
高压蒸汽灭菌
高温蒸汽灭菌锅，100kPa，121℃，15~30min
举例
培养基、加入培养基的培养皿
实验流程
计算--称量--溶化--调pH--分装--加棉塞--灭菌--倒平板
倒平板操作
1、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿着装着培养基的锥形瓶，左右拔出棉塞
2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰
3、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基导入培养皿
，左手立即盖上培养皿的皿盖
4、等待平板冷却凝固（5-10min）后，将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上
注意
平板冷却后将平板倒置，以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
纯化大肠杆菌的方法
平板划线法
接种环在蘸取菌液前、每次划线前（除第一次）、划线结束后，都需要灼烧灭菌
平板划线操作
1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红
2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞
3、将试管口通过火焰
4、将已冷却的接种环深入菌液中，蘸取一环菌液
5、将试管口通过火焰，并塞上棉塞
6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将蘸有菌种的接种环迅速深入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。
注意不要划破培养基
7、灼烧接种环，待其冷却后从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。
注意不要将最后一区的划线将第一区相连
8、将平板倒置，放入培养箱中培养
稀释涂布平板法
系列稀释操作
步骤
1、将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按10^1-10^6的顺序编号
2、用移液管吸取1mL菌液，注入10^1倍稀释的试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀
3、从10^1倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入10^2倍稀释的试管中。重复第2步的混匀操作。以此类推，直到完成最后一支试管的稀释
注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰1-2cm处。
涂布平板操作
步骤
1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中
2、取少量菌液（不超过0.1mL），滴加到培养基表面
3、将蘸有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10s
4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀
注意
1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将蘸有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。
2、操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
2、操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
3、选择菌落数在30~300间的平板进行计数
Question:第2步应如何进行无菌操作？
Answer
①酒精灯与培养皿的距离要合适
②吸管头不接触任何其他物体
③吸管要在酒精灯火焰周围
菌种的保存
临时保藏法
将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，长出菌落后，放入4℃的冰箱中保存
甘油管藏法
在3mL甘油瓶中装入1mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，放在-20℃的冰箱冷冻保存
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