miRNA经典流程
2022-12-20 10:14:30 1 举报
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六大医学经典技术路线图-miRNA经典流程2
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大纲/内容
统计学分析各分子表达与WT发展及患者生存的相关性、各分子表达水平之间的相关性、各分子表达与CSC标志物的相关性
qRT-PCR
HE染色
自我更新能力
Northern blot检测各组织相关分子mRNA
细胞周期
表达
流式细胞术
Si-geneC
双荧光素酶验证miR-A/B与geneC结合
生物信息学网站检测miR-A与miR-B；miR-A与geneC以及miR-B与geneC的靶向关系
通路验证
基因芯片筛选疾病表达差异显著的miRNA
miR-A mimic+miR-B mimic+Si-geneC
SFA
增殖
EDU
细胞株培养、筛选和CSC细胞分选（FACS）
细胞水平
动物水平
Control
miR-A、miR-B、geneC与WT的生物学相关性
miR-A/B与geneC 在WT CSCs中的功能研究
生信筛选
体内验证
活体荧光成像
qRT-PCR检测各组织相关miRNA和基因；CSC细胞分选后通过Western blot检测CSC标志物、免疫组化检测geneC及下游因子表达
制悬液
分别过表达/敲低miR-A与miR-B，检测geneC的表达
临床组织样本收集
miR-A inhibitor+miR-B inhibitor
同时过表达/敲低miR-A与miR-B，检测geneC的表达
临床水平
miR-A mimic+miR-B mimic
Western Blot检测各组织相关基因转录物和CSC标志物表达水平
集落形成能力
基因芯片筛选疾病表达差异显著的基因
分组转染
软琼脂克隆形成实验
裸鼠成瘤实验
Western blot
Co-IP验证miR-A与miR-B的结合
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